Cultura celular de mamíferos

Cultivo de células de mamíferos in vitro

O crescimento celular requer uma mistura complexa de nutrientes, incluindo açúcares, aminoácidos, albumina, vitamina, minerais e fatores de crescimento. Os meios de cultura celular fornecem esses nutrientes essenciais para cultura celular de mamíferos in vitro. Culturas celulares de mamíferos são cultivadas em incubadoras que proporcionam um ambiente estéril para crescimento em temperatura ideal (37 °C), com CO₂ a 5% para manter níveis de pH similares aos do sangue de mamíferos.  

À exceção de determinados tipos de células sanguíneas que podem ser cultivadas em suspensão, a maioria das células derivadas de tecidos de mamíferos requer adesão a uma superfície para divisão e crescimento celulares adequados. As superfícies de cultura celular são fornecidas por placas, filtros e frascos de vidro ou polistireno tratados para fixação celular. A adesão celular pode ser facilitada com o uso de polímeros sintéticos, como poli-D-lisina (PDL) e proteínas de matriz extracelular, incluindo colágeno, que proporcionam uma estrutura de fixação celular para adesão.  

Técnicas na cultura celular de mamíferos

Técnicas assépticas são usadas para impedir a contaminação de células cultivadas in vitro. Culturas celulares de mamíferos requerem repicagem ou subcultivo (o que envolve a diluição de células que atingiram confluência e substituição dos meios de cultura esgotados) para a saúde e propagação celular. Para repicar culturas celulares aderentes, as células devem ser dissociadas das superfícies de cultura com o uso de métodos enzimáticos, como tripsinização ou métodos mecânicos, como raspagem antes da transferência para novos frascos ou placas de cultura para refixação. Os métodos de contagem celular que usam hemocitômetros e contadores celulares automatizados avaliam a viabilidade celular e ajudam a determinar as densidades de inoculação para repicagem e densidades celulares apropriadas para processos a jusante (downstream). As células cultivadas podem ser criopreservadas armazenando-as em nitrogênio líquido, do qual estoques de inóculo podem ser descongelados quando estoques de trabalho forem necessários novamente.