Cultura celular microbiana

Clonagem e expressão de proteínas recombinantes

Culturas bacterianas são usadas para expressão de proteínas recombinantes, clonagem e amplificação de plasmídeos e clonagem de cosmídeos e cromossomos artificiais bacterianos (BAC). As células bacterianas podem ser alteradas para captar e incorporar plasmídeos e genes exógenos por meio de transformação. A transformação de células competentes normalmente ocorre por meio de eletroporação ou choque térmico de células competentes tratadas quimicamente.

Em seguida, as bactérias transformadas são identificadas e selecionadas com base na resistência adquirida a antibióticos, transmitida por DNA plasmidial recombinante, ou usando sistema de diferenciação branco-azul para identificar as bactérias recombinantes que expressam β-galactosidase como marcador. Leveduras também podem ser transformadas usando eletroporação e outros métodos de ensaios de duplo-híbrido em leveduras e gene repórter para estudar a expressão de proteínas e interações proteicas.

Cultivo para isolamento e identificação microbianos

Culturas microbianas são clinicamente importantes para o isolamento, detecção e diferenciação de bactérias e outros micróbios que causam doenças infecciosas. A caracterização e a identificação com o uso de métodos de cultivo se baseiam no fenótipo e no genótipo microbianos. As células podem ser isoladas por meio de inoculação de uma placa de riscado para produzir colônias puras. Meios seletivos são usados para inibir o crescimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo que outros se desenvolvam. Meios diferenciais contêm compostos que possibilitam que os micróbios sejam distinguidos visualmente pelo aspecto da colônia ou alterações nos meios circundantes resultantes das diferenças na atividade metabólica ou hemolítica. Esses meios ajudam na identificação de bactérias e outros micróbios por meio de diferenciação e eliminação.