La dispase est une protéase neutre, à action rapide mais douce, qui sépare sous forme intacte l'épiderme du derme. Elle sépare également du substrat de culture les cellules épithéliales sans les endommager. Elle clive la zone de la membrane basale et laisse les cellules épithéliales intactes.

La dispase est une métalloprotéase non spécifique.

La Dispase^® est utilisée dans la préparation de cellules provenant d'un vaste éventail de tissus et organes. Cette enzyme s'est avérée être un agent rapide, efficace mais doux permettant de dégrader la matrice extracellulaire des tissus afin de libérer des cellules individuelles en vue de leur mise en culture (culture de cellules primaires), ou de récolter des cellules déjà cultivées pour les transférer sur un nouveau substrat (culture secondaire). Elle sert également à empêcher l′agglutination indésirable des cellules cultivées en suspension.

Une unité équivaut à l′activité enzymatique qui permet de libérer les acides aminés et peptides sensibles au réactif de Folin correspondant à 1 μmol (181 μg) de tyrosine en 1 minute dans les conditions d′essai (pH 7,5, +37 °C).
Une comparaison pratique réalisée entre les unités Roche de la Dispase^® II et celles citées dans la littérature japonaise (où des concentrations en Dispase^® de 1 000 à 2 000 unités/ml sont courantes) suggère qu′une unité Roche équivaut à environ 600 unités de dispase japonaises.
Une unité de Dispase^® Roche Applied Science équivaut à 181 unités de protéase (PU), laquelle unité correspond à la libération d′acides aminés équivalant à 1 μg de tyrosine par min et par ml à pH 7,5 et +37 °C.

Activateur : La concentration en Ca²⁺ optimale est 2 mM. Les préparations enzymatiques contiennent suffisamment de Ca²⁺ pour une activité optimale.
Inhibiteurs : EDTA, EGTA, Hg²⁺, autre métaux lourds. La dispase n'est pas inhibée par le sérum.
Concentration de travail : 0,6 à 2,4 U/ml
Solution de travail : Préparation de la solution mère et de la solution de travail :

Pour produire une solution mère à 10 mg/ml, dissoudre l′enzyme Dispase^® II lyophilisée dans une solution saline tamponnée à l′HEPES (HEPES/KOH 50 mM à pH 7,4, NaCl 150 mM). Pour produire la solution de travail, diluer la solution mère ci-dessus avec le milieu de culture destiné aux cellules isolées, à une concentration finale comprise entre 0,6 et 2,4 U/ml. Veuillez noter qu′il n′est pas recommandé d′utiliser des concentrations supérieures à 2,4 U/ml. Pour un résultat optimal, filtrer la solution de travail sur une membrane de filtration de 0,22 μm.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
La solution mère reconstituée est stable 2 semaines entre 2 et 8 °C. Pour un stockage jusqu′à 2 mois, congeler la solution mère en aliquotes. Éviter les congélations et décongélations répétées ! La solution de travail diluée avec du PBS est stable entre 2 et 8 °C pendant 3 jours.

À conserver entre 2 °C et 8 °C (au sec !).

Produit réservé à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.