D5540

Diaphorase from Clostridium kluyveri

lyophilized powder, 3.0-20.0 units/mg protein (biuret)

• Synonyme(s) : Diaphorase, Lipoamide déshydrogénase, Lipoyl déshydrogénase
• CAS Number: 9001-18-7
• Numéro CE : 1.8.1.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-587-6
• Numéro MDL: MFCD00130947
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bacterial (Clostridium kluyveri)
• Niveau de qualité: 200
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: 3.0-20.0 units/mg protein (biuret)
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

Des plateformes de nanoparticules (PN) de polyacrylamide contenant du bleu de méthylène (BM) ont été testées en solution avec de la diaphorase de Clostridium kluyveri et le cofacteur NADH. Ce test visait à vérifier si l′encapsulation du BM dans des PN pouvait empêcher sa réduction et ainsi protéger son efficacité photodynamique. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée conjointement avec l′aldéhyde déshydrogénase pour construire un biocapteur de l′acétaldéhyde par immobilisation. Elle a également été employée dans la réoxydation du NADP en NADPH. Cette réaction a permis simultanément de catalyser la conversion de la résazurine en résorufine, un composé à forte fluorescence, et de détecter des quantités infinitésimales de NAADP. Le NAADP a d′abord été converti en NADP et NADPH par d′autres enzymes.

La diaphorase de Clostridium kluyveri, ou lipoyl déshydrogénase, a été utilisée dans une étude visant à évaluer les interactions protéine-protéine dans l′assemblage de l′acide lipoïque sur les 2-oxoacide déshydrogénases du métabolisme aérobie. La lipoyl déshydrogénase a également été employée dans une étude destinée à investiguer la régulation redox de la nitration de la tyrosine et de la réduction de la 3-nitrotyrosine par des antioxydants.

Conditionnement

Produit vendu sur la base du nombre d′unités de diaphorase native.

Autres remarques

Le terme « diaphorase » a été improprement attribué à plusieurs enzymes qui catalysent l′oxydation du β-NADH ou du β-NADPH en présence d′un accepteur d'électrons tel que le bleu de méthylène ou le 2,6-dichlorophénolindophénol. De nombreuses unités et de nombreux modes opératoires différents sont utilisés.
Les diaphorases qui sont spécifiques du β-NADH ou du β-NADPH sont connues. L′enzyme de cœur de porc de Straub semble posséder une activité diaphorase native (spécifique au β-NADH) mais aussi des activités lipoïque et lipoamide déshydrogénase. Il s′agirait d′une protéine unique. Toutefois, Massey signale que la « diaphorase » est probablement une lipoamide déshydrogénase dénaturée. Une pré-incubation de la préparation de cœur de porc avec du Cu²⁺ réduit l′activité de la lipoamide déshydrogénase et augmente proportionnellement l′activité de la diaphorase spécifique au β-NADH. Dans notre laboratoire, nous avons pu mettre en évidence dans une certaine mesure cet effet du cuivre sur l′enzyme de cœur de porc, mais aucun effet notoire n′a été observé sur des préparations de Clostridium kluyveri ou de levure torula. Le rapport lipoamide déshydrogénase/diaphorase permet de mesurer la dénaturation.

Définition de l'unité

Une unité de « diaphorase », ou « lipoyl » déshydrogénase, oxyde 1,0 μmole de β-NADH par minute à pH 7,5 et 25 °C, avec la réduction correspondante du 2,6-dichlorophénolindophénol.

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 3
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)