Determinazione della carica microbica (bioburden)

 Fondamenti della determinazione della carica microbica

La determinazione della carica microbica (bioburden) è un processo del controllo della qualità attraverso il quale si rileva e si quantifica la contaminazione microbica di un prodotto in diversi momenti della sua produzione, cioè dalle fasi iniziali del processo fino alla distribuzione finale. Un controllo della qualità efficace e risultati accurati nelle analisi sono essenziali per minimizzare i rischi dei consumatori e richiesti negli ambienti produttivi regolamentati. Pertanto, la determinazione della carica microbica fa spesso parte delle prove effettuate di routine per garantire sicurezza, qualità e conformità normativa a ciascun lotto di prodotto.

La carica microbica viene determinata in dispositivi medici, prodotti farmaceutici, alimenti e bevande, acqua, materiali di confezionamento, materie prime, tessuti umani e animali e prodotti cosmetici. Quando si seguono i comuni metodi di determinazione sotto descritti, è importante assicurare che essi non apportino e non uccidano batteri nei campioni in esame.

• Metodo della filtrazione su membrana per la determinazione della carica microbica
• Metodi di piastratura diretta per la determinazione della carica microbica
• Metodo del numero più probabile (MPN) per la determinazione della carica microbica

Metodo della filtrazione su membrana per la determinazione della carica microbica 

Quello della filtrazione su membrana è il metodo elettivo per i prodotti contenenti antimicrobici. Il campione viene filtrato attraverso una membrana con pori di diametro di 0,45 µm. La membrana funge da barriera e cattura i microrganismi di dimensioni maggiori dei pori. Durante la filtrazione, è possibile applicare il vuoto per velocizzare il processo. La membrana viene quindi trasferita su un terreno di coltura e posta in incubatore per almeno 5 giorni a 30–35 °C per la rivelazione dei batteri e a 20 -25 °C per la ricerca dei funghi. Si procede poi al conteggio della coltura risultante per determinare i livelli di contaminazione microbica del campione. È necessario adottare le misure necessarie ad evitare la contaminazione crociata dei campioni che potrebbe determinare falsi positivi.

Metodi di piastratura diretta per la determinazione della carica microbica

Nell’ambito dei metodi di piastratura diretta, si può distinguere tra tecniche per inclusione dell’inoculo in substrato solidificabile (pour plate) e di semina per spatolamento superficiale dell’inoculo su substrato solido (spread plate). Il metodo per inclusione dell’inoculo è preferito per via della sua maggiore accuratezza teorica. Si opera aggiungendo del terreno di coltura sterile in una piastra di Petri contenente il campione e lasciandolo solidificare. Al contrario, nel metodo dello spatolamento, è il campione che viene aggiunto in una piastra di petri contenente il terreno di coltura sterile solidificato. Indipendentemente dal metodo, dopo l’aggiunta del campione al sistema di coltura, si pone la piastra ad incubare e si procede a conteggio della coltura risultante.

Metodo del numero più probabile (MPN) per la determinazione della carica microbica

Si tratta di un metodo quantitativo usato per determinare la concentrazione batterica approssimata di un campione. La soluzione originale del campione viene diluita in serie (generalmente 10× o 2×) in brodo di coltura ed esaminata per la presenza o l'assenza di microrganismi. L’inconveniente del metodo del MPN è che esso richiede un gran numero di repliche della diluizione opportuna per restringere gli intervalli di confidenza. Inoltre, esso è efficace solo per la contaminazione batterica e non fornisce risultati affidabili con i funghi.