Concentrazione delle proteine & scambio di tampone

Concentrazione delle proteine

Per la concentrazione delle proteine ci si può avvalere di diverse metodiche, tra cui la filtrazione con membrane porose, la dialisi in soluzioni iperosmotiche e la precipitazione/salting out. Un metodo comodo è quello dell'ultrafiltrazione che utilizza membrane semipermeabili per concentrare le proteine applicando una pressione o una forza centrifuga, minimizzando nel contempo la denaturazione, la disattivazione e la degradazione proteica. In questa tecnica, il fluido in eccesso passa attraverso il filtro, mentre la proteina bersaglio viene trattenuta; diminuendo il volume del campione, la concentrazione della proteina aumenta. 

Arricchimento proteico

Nell'arricchimento proteico, si concentrano gruppi o tipi di proteine specifici presenti in un campione biologico per analisi successive. I metodi di arricchimento proteico vengono utilizzati per isolare proteine ​poco abbondanti e per ridurre la complessità del campione. L'arricchimento separa e concentra le proteine bersaglio per facilitare la successiva analisi proteomica. Spesso ai fini dell’arricchimento proteico si ricorre all'ultrafiltrazione che consente di separare le diverse classi di proteine ​in base al peso molecolare.

Scambio di tampone e dissalazione

Le proteine purificate necessitano spesso di essere trasferite in un tampone che sia adatto alle analisi successive. Scambio del tampone, dissalazione e rimozione dei detergenti possono essere eseguiti con vari metodi tra cui:

• dialisi: piccole molecole permeabili come sali, detergenti, solventi e altre impurezze vengono rimosse in base alla loro capacità di passare attraverso una membrana;
• cromatografia su colonna: i sali vengono rimossi su colonne di gel filtrazione che operano per esclusione dimensionale;
• diafiltrazione: sali, detergenti e altre impurezze vengono rimossi in base alla loro dimensione molecolare utilizzando membrane porose da ultrafiltrazione e applicando una pressione o la forza centrifuga.