Interakcje białek i kwasów nukleinowych
Białka są cząsteczkami roboczymi wewnątrz komórki i są odpowiedzialne za niezliczone działania biologiczne, które komórki przechodzą, aby funkcjonować i przetrwać. Co ciekawe, zróżnicowany zestaw białek oddziałuje również z DNA. DNA w naszych chromosomach jest często ściśle związane wokół białek, które są określane jako chromatydy w chromosomie. Te wiązki białko-DNA pomagają upakować DNA w zwartą formę w jądrze komórkowym. Potężne narzędzia i techniki molekularne zostały opracowane przez naukowców w celu wyizolowania tych wiązek białko-DNA i innych kompleksów białkowych wiążących DNA do dalszych zastosowań.
Immunoprecypitacja
Immunoprecypitacja przy użyciu wysoce specyficznych przeciwciał do RNA i białek wiążących DNA (np. czynników transkrypcyjnych), naukowcy mogą ocenić regulację szlaków molekularnych i lepiej zrozumieć funkcję genów zarówno w zdrowych, jak i chorych tkankach.
Obecnie dostępnych jest wiele technologii i metod badania interakcji białko-RNA i białko-DNA, które nadają się do dodatkowych analiz. Na przykład, testy immunoprecypitacji chromatyny (ChIP) są często wykorzystywane do badania interakcji czynnik transkrypcyjny-DNA w badaniach ekspresji genów i modyfikacji epigenetycznych. Natomiast Testy wytrącania RNA (RIP) są powszechnie stosowane do badania białek wiążących się z mRNA, niekodującymi RNA, miRNA i wirusowymi RNA. Powszechnym wyzwaniem w badaniach immunoprecypitacji jest specyficzność lub dostęp przeciwciała do białka będącego przedmiotem zainteresowania. Aby obejść niektóre z tych problemów, naukowcy wykorzystują technologię rekombinacji białek do ekspresji zmodyfikowanych białek z unikalnymi znacznikami, takimi jak znacznik hemaglutyniny (HA), które są rozpoznawane z wysoką specyficznością przez odpowiednie przeciwciało.
Odwiedź naszą wyszukiwarkę dokumentów, aby znaleźć arkusze danych, certyfikaty i dokumentację techniczną.
Technologia testu ligacji zbliżeniowej
Co ciekawe, naukowcy wykorzystujący technologie białko-DNA opracowali nowe narzędzia i metody oceny interakcji białko-białko. Dzięki wysokiej specyficzności i czułości, Test ligacji zbliżeniowej (PLA) technologia ułatwia in situ wykrywanie endogennych białek, modyfikacji białek i interakcji białek. Podobnie do technik immunoprecypitacji, test PLA wykorzystuje wysoce specyficzne przeciwciała pierwotne do rozpoznawania dwóch interesujących białek. Jednak zmodyfikowane przeciwciała drugorzędowe znakowane oligonukleotydami, działające jako sonda PLA, są używane do wiązania się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Tylko wtedy, gdy oba białka są obecne i znajdują się w pobliżu, hybrydyzujące oligonukleidy łączące łączą się z sondami PLA. Dodanie ligazy tworzy zamkniętą, kolistą matrycę DNA. Z nowo utworzoną kolistą matrycą DNA, amplifikacja tocząca się po okręgu jest teraz możliwa z dodatkiem polimerazy DNA i ostatecznie generuje znacznie wzmocniony sygnał, który jest związany z sondą PLA. Wybór odpowiedniej technologii interakcji białek i kwasów nukleinowych będzie w dużej mierze zależał od potrzeb badacza w zakresie dalszych zastosowań.
Powiązane artykuły
- Dowiedz się, jak działa technologia Proximity Ligation Assay i jak zestaw kontrolny interakcji białko-białko może potwierdzić wykrywanie in situ dimeryzacji EGFR-HER2 indukowanej przez EGF.
- We synthesize peptides up to 200 amino acids in length using state of the art solid support chemistries and purify peptides using HPLC. A variety of purity levels, scales of synthesis and extensive modifications are available.
- Immunoprecypitacja RNA (RIP) jest podstawową metodą analizy białek, które oddziałują i modyfikują funkcję mRNA, małych RNA, wirusowych RNA lub lncRNA.
- Duolink® PLA Multicolor technology and the quantification of protein-protein interactions in fixed tissues and cells.
- Support information including tips and tricks, frequently asked questions, and basic troubleshooting.
- Zobacz wszystkie (44)
Powiązane protokoły
- Niniejszy protokół opisuje sposób przeprowadzania immunofluorescencyjnego wykrywania białek w komórkach i tkankach.
- Duolink® kits use in situ PLA®, a proximity ligation assay technology, to accurately and objectively quantify individual proteins, and their interactions and modifications in unmodified cells and tissue.
- The video follows the simple and straightforward procedure that allows you to detect, quantify and obtain cell localization of protein interactions and their modifications in a single experiment.
- Na tej stronie pokazano, jak oczyszczać lub usuwać białka wiążące DNA za pomocą Heparin Sepharose High Performance, Heparin Sepharose 6 Fast Flow, Capto Heparin firmy Cytiva.
- Zobacz wszystkie (18)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Jak możemy pomóc
W przypadku jakichkolwiek pytań, prosimy o przesłanie prośby o wsparcie klienta
lub rozmowę z naszym zespołem obsługi klienta:
Email custserv@sial.com
lub zadzwoń +1 (800) 244-1173
Dodatkowe wsparcie
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulatory i aplikacje
Web Toolbox - narzędzia naukowe i zasoby dla chemii analitycznej, nauk przyrodniczych, syntezy chemicznej i materiałoznawstwa.
- Customer Support Request
Obsługa klienta, w tym pomoc przy zamówieniach, produktach, kontach i kwestiach technicznych związanych z witryną.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?