Jeden rozpuszczalnik (dioksan), dwie zasady (NaOtBu, Cs₂CO₃) Przewodnik krok po kroku dla zestawu do badań przesiewowych reakcji aminowania Buchwalda-Hartwiga

2 zasady (NaOt-Bu, 2 M w THF i Cs₂CO₃)
1 rozpuszczalnik (1,4-dioksan)
12 wstępnie zważonych katalizatorów

Wymagane materiały - konfiguracja:

• 1 torebka mylarowa z KitAlysis Buchwald-Hartwig Amination Reaction Screening Kit i będziesz używać następujących składników
  - 12 x 2 wstępnie zważone katalizatory w szklanych fiolkach obciążonych mieszadłami i zwieńczonych matą z korkiem
  - 1 fiolka reakcyjna zawierająca wstępnie zważony Cs₂CO₃
  - 1 pusta fiolka reakcyjna o pojemności 4 ml
• 1 NOWY KitAlysis 24-dołkowa folia zastępcza bloku reakcyjnego
• 2 ampułki po 2 ml 1,4-dioksanu (w pudełkach na ampułki)
• 2 NOWE pręty mieszające
• KitAlysis 24-dołkowy blok reakcyjny (sprzedawany oddzielnie)
• KitAlysis Benchtop Inertion Box (sprzedawany oddzielnie) lub pudełko na rękawiczki/torba na rękawiczki
• KitAlysis Torque Screwdriver Set (sprzedawany oddzielnie)

Potrzebne dodatkowe (nie dołączone) elementy:

• -Pipette (0-100 µL) & tips
• 1 (1 mL) strzykawki z długimi igłami
• Twój halogenek arylowy i amina
• Nitrogen (lub Argon): z linii wyciągowej lub zbiornika
• 1 płyta grzejna z możliwością mieszania
• 1 płyta mieszająca (lub płyta grzejna do użycia bez ogrzewania)
• Fiolki HPLC, 96-dołkowy blok automatycznego próbnika HPLC lub płytki TLC.

Roztwory i zawiesiny do przygotowania: Przejdź do strony konfiguracji użytkownika online, aby wprowadzić masy cząsteczkowe do pliku Excel do pobrania.

Procedura konfiguracji:

(KitAlysis wideo dla przydatnych wizualizacji)

• Podgrzej płytę grzejną do 100 °C (użyj łaźni olejowej lub drugiego bloku reakcyjnego, aby utrzymać temperaturę i uniknąć skoków).
• Umieść NEW KitAlysis  24-dołkową folię zastępczą bloku reakcyjnego na pokrywie bloku reakcyjnego (upewnij się, że wszystkie otwory, w tym otwór sondy temperatury, są zgodne z odpowiednimi otworami w folii)
• Sprawdź wszystkie śruby, aby upewnić się, że nie są zerwane. Wymień wszystkie zerwane śruby na dostarczone zamienniki.
• Umieść zestaw KitAlysis Benchtop Inertion Box z rurką podłączoną do gazu obojętnego na drugim, &nieogrzewaną płytkę mieszającą  (KitAlysis Benchtop Inertion Box set-up for details).
• Umieść KitAlysis 24-dołkowy blok reakcyjny z pokrywką w KitAlysis Benchtop Inertion Box. Rozpocząć przepływ azotu i przeciągnąć 5 minut. Pozostawić przepływ azotu na pozostałą część konfiguracji.
• Umieszać substraty bezpośrednio w dostarczonej pustej fiolce reakcyjnej o pojemności 4 ml i wstępnie zważonej fiolce Cs₂CO₃ zgodnie z recepturą pomijając rozpuszczalnik i roztwór NaOt-Bu. Dodać jedno mieszadło do każdej fiolki z mieszaniną. Oznaczyć jako "Cs₂CO₃ mieszanina substratów A" i "mieszanina substratów NaOt-Bu B".Jeśli amina jest lotna, należy dodać ją jako ostatnią (po dodaniu mieszanin rozpuszczalników) bezpośrednio do wymaganych fiolek reakcyjnych za pomocą strzykawki z oddzielnej fiolki, która została szybko oczyszczona, a następnie zakorkowana przed umieszczeniem w Inertion Box.
• Częściowo otwórz pokrywę KitAlysis Benchtop Inertion Box. Umieść "Cs₂CO₃ Substrate Mixture A" w środkowym otworze po lewej stronie tacy dyfuzora Inertion Box. Umieść "NaOt-Bu Substrate Mixture B" w środkowym otworze po prawej stronie płytki. Takie umieszczenie fiolek pozwala na najlepszy przepływ gazu obojętnego (zdejmij pokrywki z mieszanin stałych przed umieszczeniem ich w zalecanych otworach, zachowując pokrywki w Inertion Box do późniejszego użycia w razie potrzeby).
• Przenieś zakorkowane, 24-fiolkowe, wstępnie załadowane katalizatory do bloku reakcyjnego, upewniając się, że załadowano je zgodnie z pasującym schematem na opakowaniu i bloku reakcyjnym.
• Używając krakera do ampułek, otwórz 2 ampułki dioksanu i 1 roztwór NaOt-Bu i szybko umieść je w otworach ampułek znajdujących się wzdłuż dna Inertion Box, poniżej bloku reakcyjnego.
• Gdy wszystkie składniki znajdą się w KitAlysis Bechtop Inertion Box, zamknij pokrywę i próżnuj przez dodatkowe 5 minut. Pozostawić przepływ azotu do końca konfiguracji.
• Oczyścić igłę i strzykawkę w otworze dyfuzora azotu 2x, pociągając, a następnie popychając tłok. Używając oczyszczonej igły i strzykawki, dodaj wymagane ilości rozpuszczalnika do otwartych fiolek z mieszaniną substratów. Nie dodawaj jeszcze roztworu NaOt-Bu do mieszaniny substratów B - jest on dodawany oddzielnie jako ostatni, bezpośrednio do fiolek reakcyjnych.
• Mieszaj mieszaniny aż do uzyskania roztworu (1-2 min). W przypadku zawiesin, patrz "dodatkowe wskazówki" poniżej.
• Podczas mieszania mieszanin, ostrożnie zdejmij matę zakrywającą 24-fiolkowe, wstępnie załadowane katalizatory w bloku reakcyjnym.
• Dozuj 100 uL roztworu "Cs₂CO₃ Substrate Mixture A" do fiolek A1-A6 i fiolek B1-B6 zgodnie z poniższym schematem.  Może pozostać bardzo niewielka ilość nadmiaru roztworu. Zachowaj go jako wzorzec reakcji dla HPLC/TLC później.
• Dozuj 100 µL roztworu "NaOt-Bu Substrate Mixture B" do fiolek C1-C6 i fiolek D1-D6 zgodnie z poniższym schematem.
• Po dodaniu mieszanin rozpuszczalników, dozować 15 µL roztworu NaOt-Bu do każdej fiolki w fiolkach C1-C6 i fiolkach D1-D6 zgodnie z poniższym schematem.

• Po dozowaniu wszystkich mieszanin substratów zgodnie z recepturą, weź pokrywę 24-dołkowego bloku reakcyjnego KitAlysis i wyrównaj śruby z otworami w płytce.Upewnij się, że otwory sondy temperatury znajdują się w jednej linii zarówno na pokrywie, jak i na bloku.
• Przykręć pokrywę zgodnie ze wskazówkami i wzorem przedstawionym w sekcji "dodatkowe wskazówki" poniżej. Przed wyjęciem KitAlysis 24-dołkowego bloku reakcyjnego z pudełka, upewnij się, że pokrywa jest równomiernie uszczelniona na podstawie. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego przykręcania.
• Po całkowitym uszczelnieniu wyjmij 24-dołkowy blok reakcyjny KitAlysis z pudełka. Umieść na podgrzanej płycie grzejnej z sondą przez pokrywę i włożoną do bloku. Ogrzewać w temperaturze 100°C przez noc, mieszając z prędkością 300 obr. Jeśli substrat jest wrażliwy na działanie zasady, obniżyć temperaturę do 60-80°C. Wyłącz dopływ azotu do pojemnika i pozbądź się wszelkich niewykorzystanych chemikaliów.
• Przygotuj roztwór gaszący w butelce z wymienną pokrywką zgodnie z poniższym przepisem do analizy HPLC. Możliwa jest również analiza TLC.

Receptura roztworu gaszącego  

-49 mL CH3CN

-1 mL AcOH

-15.4 mg bifenylu (KitAlysis wzorzec wewnętrzny dostarczony w zestawie)

Uwaga: Z tego przepisu uzyskuje się 50 ml roztworu podstawowego, co wystarcza do przeprowadzenia wszystkich czterech badań przesiewowych w KitAlysis Zestawie do badań przesiewowych z reakcją aminowania Buchwalda-Hartwiga./p>

• Postępuj zgodnie z poniższą procedurą roboczą

Procedura robocza i analiza

• Ochłodź blok reakcyjny. Zdejmij pokrywę za pomocą małego śrubokręta bez momentu obrotowego.
• Sprawdź każdą fiolkę pod kątem utraty rozpuszczalnika i zapisz.
• Dodać 500 µL przygotowanego roztworu gaszącego do każdej fiolki.
• Założyć pokrywkę, dokręcić środkową śrubę i mieszać na płytce mieszającej (BEZ OGRZEWANIA) przez 2-3 minuty. NIE ODWRACAĆ BLOKU K.
• Po 5 minutach mieszania, pozostawić płytkę w spoczynku (bez mieszania) na 5 minut, aby umożliwić nierozpuszczalnemu materiałowi osadzenie się z roztworu.
• Podczas gdy płytka odpoczywa, dodaj 700 uL roztworu gaszącego do każdej z 24 indywidualnie oznakowanych (A1, A2 itd.) fiolek HPLC lub do każdej z 24 studzienek 96-dołkowego bloku automatycznego próbnika HPLC/UPLC.
• Zdejmij ostrożnie pokrywkę KitAlysis 24-dołkowego bloku reakcyjnego.
• Używając czystej pipety za każdym razem, usuń porcję 25 µL z każdej fiolki do odpowiednich fiolek HPLC lub bloku HPLC.Należy uważać, aby pobrać materiał z górnej części fiolek, aby uniknąć wytrącenia się osadu.
  
• Uruchom na automatycznym próbniku HPLC.

Dodatkowe wskazówki

Uszczelnianie płytki - przykręcanie pokrywy

Prawidłowe uszczelnienie płytki ma kluczowe znaczenie dla sukcesu. Kluczem jest lekki, równomierny nacisk na pokrywę bloku, aby utrzymać pokrywę płasko podczas uszczelniania.

1. Wkręć śruby, upewniając się, że otwory na sondę temperatury w podstawie i pokrywie są wyrównane w KitAlysis 24-dołkowym bloku reakcyjnym.
2. Wstępnie wyrównaj: Za pomocą kciuka i palca wskazującego naciśnij pokrywę pudełka, aż zrówna się z fiolkami. Następnie, używając KitAlysis Torque Screwdriver, wkręć śruby, aż zrównają się, ale nie dokręcą, z górną częścią pudełka, zgodnie ze wzorem krzyża podanym poniżej. Sprawdź, czy pokrywa jest równomiernie przylegająca do podstawy ze wszystkich stron. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego przykręcania.
3. Dokręć: Powtarzaj ten sam schemat, aż KitAlysis Torque Screwdriver "kliknie", wskazując na całkowite dokręcenie. Obejdź blok jeszcze raz, aby upewnić się, że wszystkie śruby są dokręcone.

.

Sonda do płyty grzejnej nie pasuje do otworu bloku reakcyjnego

Użyj małej łaźni olejowej lub innego metalowego bloku (aby uzyskać najlepsze wyniki) z tyłu płyty grzejnej i umieść tam sondę. Umieść blok reakcyjny jak najbliżej środka płyty grzejnej, aby uzyskać bardziej równomierne mieszanie.

Dodawanie zawiesiny

Z powodu wąskiego otworu końcówek pipety, dodawanie zawiesiny spowoduje zablokowanie. Aby pomóc w równomiernym dozowaniu, wystarczy odciąć koniec końcówki przy pierwszym znaczniku (~10 mm). Aby zapewnić równomierne rozproszenie porcji, bardzo ważne jest mieszanie mieszaniny podczas pobierania porcji w celu dozowania do odpowiedniej fiolki reakcyjnej.