Khắc phục sự cố nuôi cấy tế bào

Cell Line Misidentification

Các nghiên cứu gần đây ước tính nhận dạng sai có thể ảnh hưởng đến một phần ba tất cả các dòng tế bào đang được sử dụng. Những khám phá này có khả năng gọi vào các phát hiện được công bố về các hệ thống sinh học dựa trên kết quả từ các mô hình dòng tế bào. Các yếu tố dẫn đến nhận dạng sai dòng tế bào/nhiễm bẩn chéo bao gồm:

• Nhiễm bẩn các đường tế bào tích cực: Phân tích isoenzyme đã chứng minh rằng nhiều dòng tế bào có chung một enzyme hiếm với các tế bào HeLa. Hela đã được chứng minh là dòng tế bào xâm lấn phổ biến nhất trong các cổ phiếu nuôi cấy.
• Các phương pháp ghi chép và dán nhãn: Bình nuôi cấy tế bào, đĩa, lọ đông lạnh và ngăn chứa đông lạnh phải được dán nhãn rõ ràng và các bản đồ lưu trữ nitơ lỏng được duy trì nghiêm ngặt để phản ánh việc bổ sung, rút và di dời các kho tế bào.
• Cell line borrowing: Chia sẻ các tế bào giữa các phòng thí nghiệm lân cận là một thực tế phổ biến dẫn đến lỗi trong nhận dạng dòng tế bào. Các dòng điện thoại chỉ nên được lấy từ các kho tế bào có uy tín như ECACC, Bộ sưu tập các nền văn hóa tế bào được xác thực ở châu Âu tại Bộ Y tế Công cộng Anh.

Được thông báo về các nguyên nhân phổ biến gây ô nhiễm chéo dòng tế bào và cách bảo vệ công việc của bạn khỏi hậu quả của nó.

Nhiễm bẩn vi sinh vật của nuôi cấy tế bào

Môi trường nuôi cấy tế bào và điều kiện ủ bệnh cung cấp môi trường lý tưởng cho các tế bào, cũng như vi khuẩn, nấm và các chất gây ô nhiễm virus. Để tăng cường tuân thủ kỹ thuật nuôi cấy vô trùng, nuôi cấy phải thường xuyên được kiểm tra bằng kính hiển vi để có bằng chứng về vi khuẩn và nấm xâm nhập. Một số chất gây ô nhiễm vi khuẩn phổ biến trốn tránh phát hiện thị giác, vì có đến 30% tất cả các nuôi cấy được ước tính bị nhiễm mycoplasma. Thuốc thử và bộ dụng cụ được thiết kế để phát hiện mycoplasma vô hình thường dựa trên khuếch đại PCR, cũng có thể được sử dụng để phát hiện các chất gây ô nhiễm của virus.

Tìm hiểu cách giữ cho nền văn hóa của bạn không bị nhiễm bẩn sinh học và hóa học.

Sự phát triển tế bào kém

Thật thất vọng khi các tế bào trong nuôi cấy có vẻ khỏe mạnh không đạt được hợp lưu. Khi các chất gây ô nhiễm được loại trừ, một số rào cản có thể xảy ra đối với sự nhân đôi của tế bào khỏe mạnh bao gồm:

• Chất lượng và điều kiện văn hóa/đóng băng phương tiện
• Chất lượng và tính phù hợp của ứng dụng của các bổ sung
• Liệt kê tế bào không chính xác trong khi đóng băng hoặc đi qua

Khi các tế bào có vẻ khả thi nhưng không mở rộng, hãy tìm hiểu những gì bạn có thể làm để cải thiện điều kiện nuôi cấy để tăng trưởng tối ưu trước khi quay trở lại nitơ lỏng.

Tháo các kiểu hình tế bào gắn kết

Các tế bào bám dính có thể tự tách ra trong nuôi cấy, đơn lẻ hoặc trong các tấm. Khi các nền văn hóa gắn kết không theo cách đó, hãy biết phải kiểm tra điều gì và làm thế nào để khôi phục sự gắn kết trong văn hóa.

Cell Clumping

Các tế bào trong hệ thống treo bắt chước trong điều kiện cơ thể sống dưới dạng đơn lẻ. Khi các tế bào bắt đầu cùn, điều này có thể là do axit nucleic dính, có mặt trong môi trường khi nuôi cấy bị căng thẳng. Điều gì ẩn giấu trong môi trường có thể khiến tế bào bị đóng lại? Đọc thêm ở đây về cách loại bỏ sự tích tụ khỏi các nền văn hóa.

Cell Death in Culture

Khi các tế bào chết trong nuôi cấy, ô nhiễm vi sinh vật trước tiên phải được loại trừ. Các yếu tố khác có thể góp phần vào sức khỏe hoặc hành vi tế bào kém không phù hợp với kiểu hình bao gồm:

• Điều kiện hàng đông lạnh
• Số đường truyền/quá lưu của ô
• Căng thẳng môi trường
• Quá tiêu hóa với các enzyme phân ly

Thiết bị thích hợp, thuốc thử đủ điều kiện và các giao thức chuyên môn là chìa khóa để giải quyết các kết quả nuôi cấy tế bào bất ngờ.

Precipitates in Culture Media

Nếu nó không bị nhiễm bẩn, các hạt trong nuôi cấy thường có một lời giải thích vô cơ. Hiểu các thành phần của bộ đệm và phương tiện cân bằng, đồng thời tìm hiểu thêm về việc giữ các thành phần phương tiện trong tình trạng treo.