C2674

Colagenase

lyophilized powder, ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units), 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

• Sinônimo(s): Clostridiopeptidase A
• CAS Number: 9001-12-1
• Número CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-582-9
• Número MDL: MFCD00130830
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Propriedades

• fonte biológica: Clostridium histolyticum
• Nível de qualidade: 200
• tipo: Type I-A
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units); 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• peso molecular: 68-130 kDa
• concentração: 1 mg/mL
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 6.3-8.8
• Condições de expedição: ambient
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A colagenase é uma protease que cliva a proteína em tripla-hélice chamada colágeno. Há três tipos de colagenases teciduais e estas pertencem à família das metaloproteinases de matriz (MMP). A colagenase obtida do Clostridium histolyticum tem uma atividade muito potente, pois digere colágeno de ambas as terminações, em temperaturas tão baixas quanto 4 ºC-10 °C. Misturas de colágeno brutas contêm duas enzimas principais, a saber colagenase e clostripaína.

Aplicação

A colagenase de Clostridium histolyticum é usada para as seguintes aplicações:

• Isolamento de células de Sertol
• Usada na comparação de métodos enzimáticos
• Usada durante a preparação de tecidos para imunocitoquímica
• Extração de esperma testicular
• Preparação de suspensões de células individuais
• Imunofluorescência

Este produto é adequado para a desagregação de tumor humano, rim de camundongo, cérebro humano adulto e fetal, pulmão e muitos outros tecidos epiteliais. Demonstrou-se também que é eficaz em estudos de perfusão de fígado e rim, digestão de pâncreas, isolamento de células de fígado de rato não parenquimais e preparo de hepatócitos. A colagenase foi usada também no preparo de tecido arterial para o estudo de produtos finais da glicosilação avançada. Esta enzima foi testada para a liberação de hepatócitos em uma concentração de cerca de 1 mg/ml. As concentrações para digestão variam de 0,1 a 5 mg/ml.

Adequado para uso na preparação de suspensão de célula única para sequenciamento.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A colagenase é ativada por quatro gramas de átomos de cálcio por mol de enzima. Ela é inibida por ácido etileno glicol-bis(beta-aminoetil éter)-N, N, N′,N′-tetracético, beta-mercaptoetanol, glutationa, ácido tioglicólico e 8-hidroxiquinolina.

O produto da colagenase é uma mistura de enzimas secretada por C. histolyticum, com diferentes produtos diferenciados pelas proporções relativas de 10-18 componentes encontrados nas enzimas secretadas. Os principais componentes são duas colagenases, clostripaína e uma protease neutra. A ação sinergística dessas enzimas degrada o colágeno e outros materiais intracelulares. A ação das enzimas colagenases e da protease neutra é necessária para liberação eficaz das células do tecido. Vários tipos de colágenos são substratos naturais da colagenase.

Atenção

Como fornecido, este produto é estável por um ano a -20 °C. Não há perdas na atividade de FALGPA ou proteases em 30 dias a 37 °C, 50 °C e -20 °C. As soluções de colagenase bruta são estáveis se forem congeladas rapidamente em alíquotas (na concentração de 10 mg/ml) e mantidas congeladas a -20 °C. Ciclos adicionais de congelamento/descongelamento danificam a solução. O produto retém 100% de atividade ao longo de 7 horas se mantido em gelo.

Definição da unidade

Uma unidade de digestão de colágeno (CDU) libera peptídeos de colágeno do tendão de Aquiles bovino que equivalem em cor de ninidrina a 1,0 μmol de leucina em 5 horas em pH 7,4 a 37 °C na presença de íons de cálcio. Uma unidade de hidrólise de FALGPA hidrolisa 1,0 μmol de furilacriloil-Leu-Gli-Pro-Ala por min a 25 °C. Uma unidade de protease neutra hidrolisa caseína para produzir cor equivalente a 1,0 μmol de tirosina por 5 h em pH 7,5 a 37 °C. Uma unidade de clostripaína hidrolisa 1,0 μmol de BAEE por min em pH 7,6 a 25 °C na presença de DTT.

Nota de preparo

Essa colagenase é obtida a partir de filtrado de cultura de Clostridium histolyticum. Acredita-se que o filtrado da cultura contenha pelo menos 7 proteases diferentes, que variam em peso molecular de 68-130 kDa. Esse produto é do tipo I-A. Geralmente as soluções são preparadas na concentração de 1-2 mg/ml em tampão TESCA (contendo TES 50 mM, cloreto de cálcio 0,36 mM, pH 7,4 a 37 °C).

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves