C7657
Colagenase
Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid
Sinônimo(s):
Clostridiopeptidase A
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Clostridium histolyticum
Nível de qualidade
Formulário
powder
atividade específica
≥800 CDU/mg solid
2-5 FALGPA units/mg solid
peso molecular
68-130 kDa
solubilidade
TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
aplicação(ões)
diagnostic assay manufacturing
temperatura de armazenamento
−20°C
Aplicação
A clostridiopeptidase A foi usada em um estudo que descreveu um método quantitativo para avaliar pequenas quantidades de colágeno com base em espectrometria de massa (MS) por MALDI-TOF (dessorção/ionização a laser auxiliada por matriz por tempo de voo) após a digestão do colágeno.
Este produto foi usado no isolamento de linhagens celulares de adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) e para cultura de tecidos de fibroblastos pancreáticos.
Ações bioquímicas/fisiológicas
A colagenase é ativada por quatro gramas de átomos de cálcio por mol de enzima. Ela é inibida por ácido etileno glicol-bis(beta-aminoetil éter)-N, N, N′,N′-tetracético, beta-mercaptoetanol, glutationa, ácido tioglicólico e 8-hidroxiquinolina.
A liberação eficaz de células do tecido requer a ação de enzimas colagenase e da protease neutra. A colagenase é ativada por quatro átomos-grama de cálcio (Ca2+) por mol de enzima. Acredita-se que o filtrado da cultura contenha pelo menos 7 proteases diferentes, que variam em peso molecular de 68-130 kDa. O pH ideal é 6,3-8,8. A enzima é usada tipicamente para digerir os componentes conjuntivos em amostras de tecido para liberar células individuais. O tratamento com colagenase pode provocar a morte de algumas células. Tipicamente, concentrações na faixa de 0,1 a 5 mg/ml são usadas para digestão. A duração da reação varia de 15 minutos a várias horas e para gerar uma eficácia satisfatória da dissociação celular que não cause morte celular excessiva. O tampão de Krebs-Ringer com cálcio e BSA é preferível e Zn2+ é necessário para atividade.
Qualidade
Também contém atividades de clostripaína, protease neutra não específica e tripsina.
Definição da unidade
Uma unidade de digestão de colágeno (CDU) libera peptídeos de colágeno do tendão de Aquiles bovino que equivalem em cor de ninidrina a 1,0 μmol de leucina em 5 horas em pH 7,4 a 37 °C na presença de íons de cálcio. Uma unidade de hidrólise de FALGPA hidrolisa 1,0 μmol de furilacriloil-Leu-Gli-Pro-Ala por min a 25 °C. Uma unidade de protease neutra hidrolisa caseína para produzir cor equivalente a 1,0 μmol de tirosina por 5 h em pH 7,5 a 37 °C. Uma unidade de clostripaína hidrolisa 1,0 μmol de BAEE por min em pH 7,6 a 25 °C na presença de DTT.
Nota de preparo
A solução-estoque pode ser preparada dissolvendo-se 0,05-0,1 mg/ml de colagenase em tampão TES 50 mM com cloreto de cálcio (TESCA) 0,36 mM, pH 7,4, a 37 °C.
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Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Órgãos-alvo
Respiratory system
Código de classe de armazenamento
11 - Combustible Solids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 1
Ponto de fulgor (°F)
Not applicable
Ponto de fulgor (°C)
Not applicable
Equipamento de proteção individual
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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