T1426

Tripsina

TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein

• Sinônimo(s): Serine Protease 1
• CAS Number: 9002-07-7
• Número CE: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-650-8
• Número MDL: MFCD00082094
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: bovine pancreas
• Nível de qualidade: 300
• grau: Proteomics Grade
• Formulário: essentially salt-free, lyophilized powder
• atividade específica: ≥10,000 BAEE units/mg protein
• peso molecular: 23.8 kDa
• solubilidade: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• atividade externa: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes de uma superfície de cultura. A concentração de tripsina necessária para desalojar as células do substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A taxa de hidrólise dessa reação é diminuída se houver um resíduo ácido em qualquer lado do sítio de clivagem, e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxila do sítio de clivagem. O pH ótimo para a atividade de tripsina é 7-9. A tripsina também pode clivar ligações de éster e amida de derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado a soluções de tripsina como um quelante que neutraliza íons de cálcio e magnésio que obscurecem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.

Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.

Componentes

A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos produzidos pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação petídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.

Atenção

As soluções em HCl 1 mM são estáveis por 1 ano em alíquotas e armazenadas a -20 °C. A presença de Ca²⁺ também diminui a autólise de tripsina e mantém sua estabilidade em solução. A tripsina também retém a maior parte de sua atividade em ureia 2,0 M, guanidina HCl 2,0 M ou SDS 0,1% (p/v).

Definição da unidade

Uma unidade de BAEE produz A₂₅₃ de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato.

Nota de preparo

Solúvel em HCl 1 mM a 1 mg/ml.
Também é tratado com TPCK e dialisado. O tratamento com L-1-tosilamida-2-feniletil clorometil cetona (TPCK) reduz a atividade de quimotripsina que costuma estar presente na tripsina.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves