T4799

Tripsina

lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

• Sinônimo(s): Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• CAS Number: 9002-07-7
• Número CE: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-650-8
• Número MDL: MFCD00082094
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Propriedades

• fonte biológica: Porcine pancreas
• Nível de qualidade: 200
• linha de produto: BioReagent
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
• peso molecular: 23.8 kDa
• concentração: 25 mg/mL
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 7.6
• Condições de expedição: ambient
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A tripsina é aplicável para desagregação de tecidos devido à sua ação eficaz e tolerância em relação à neutralização induzida por soro e diferentes tipos celulares.

Aplicação

A tripsina do pâncreas porcino foi usada para digerir ossos de galinha. Também foi usada no isolamento de células endoteliais lúteas.

Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes da superfície de uma cultura. A concentração de tripsina necessária para deslocar as células do seu substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel†. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A velocidade da hidrólise dessa reação é retardada se houver um resíduo ácido em qualquer um dos lados do sítio de clivagem e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxílico do sítio de clivagem. O pH ideal para atividade da tripsina é 7-9. A tripsina pode agir também para clivar ligações de ésteres e amidas em derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado às soluções de tripsina como agente quelante que neutraliza os íons de cálcio e magnésio que obstruem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.

Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.

Componentes

A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos, produzido pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação peptídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.

Atenção

As soluções em HCl 1 mM são estáveis por 1 ano em alíquotas e armazenadas a -20 °C. A presença de Ca²⁺ também diminui a autólise de tripsina e mantém sua estabilidade em solução. A tripsina também retém a maior parte de sua atividade em ureia 2,0 M, guanidina HCl 2,0 M ou SDS 0,1% (p/v).

Definição da unidade

Uma unidade de BAEE produz um ΔA₂₅₃ de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato. Uma unidade de BTEE = 320 unidades de ATEE. Volume de reação = 3,2 ml (caminho óptico de 1 cm).

Nota de preparo

Esse produto é um pó liofilizado solúvel em solução salina balanceada de Hank na concnetração de 25 mg/ml.
Para aplicações que necessitam de EDTA, a solubilização da tripsina deve ser realizada com uma solução salina tamponada sem Ca²⁺ nem Mg²⁺.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves