T5266

Tripsina

lyophilized powder, γ-irradiated, BioXtra, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

• CAS Number: 9002-07-7
• Número CE: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-650-8
• Número MDL: MFCD00082094
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Propriedades

• fonte biológica: Porcine pancreas
• Nível de qualidade: 200
• esterilidade: γ-irradiated
• linha de produto: BioXtra
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
• peso molecular: 23.8 kDa
• concentração: 25 mg/mL
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: 2-8°C

Descrição

Aplicação

Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes da superfície de uma cultura. A concentração de tripsina necessária para deslocar as células do seu substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel†. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A velocidade da hidrólise dessa reação é retardada se houver um resíduo ácido em qualquer um dos lados do sítio de clivagem e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxílico do sítio de clivagem. O pH ideal para atividade da tripsina é 7-9. A tripsina pode agir também para clivar ligações de ésteres e amidas em derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado às soluções de tripsina como agente quelante que neutraliza os íons de cálcio e magnésio que obstruem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.

Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.

Componentes

Trypsin consists of a single chain polypeptide of 223 amino acid residues, produced by the removal of the N-terminal hexapeptide from trypsinogen which is cleaved at the Lys - lle peptide bond. The sequence of amino acids is cross-linked by 6 disulfide bridges. This is the native form of trypsin, beta-trypsin. BETA-trypsin can be autolyzed, cleaving at the Lys - Ser residue, to produce alpha-trypsin. Trypsin is a member of the serine protease family.

Atenção

Solutions in 1 mM HCl are stable for 1 year in aliquots and stored at -20°C. The presence of Ca²⁺ will also diminish the self-autolysis of trypsin and maintain its stability in solution. Trypsin will also retain most of its activity in 2.0 M urea, 2.0 M guanidine HCl, or 0.1% (w/v) SDS.

Definição da unidade

Uma unidade de BAEE produz um ΔA₂₅₃ de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato. Uma unidade de BTEE = 320 unidades de ATEE. Volume de reação = 3,2 ml (caminho óptico de 1 cm).

Nota de preparo

This product is a lyophilized powder soluble in Hank′s Balanced Salt Solution at 25 mg/mL.
For applications that involve EDTA, solubilizing trypsin should be done with a buffered salt solution contaiing no Ca²⁺ or Mg²⁺.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves