T7409

Tripsina

lyophilized powder, Type II-S, 1,000-2,000 units/mg dry solid

• CAS Number: 9002-07-7
• Número CE: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-650-8
• Número MDL: MFCD00082094
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• tipo: Type II-S
• Nível de qualidade: 200
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: 1,000-2,000 units/mg dry solid
• peso molecular: 23.8 kDa
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes da superfície de uma cultura. A concentração de tripsina necessária para deslocar as células do seu substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel†. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A velocidade da hidrólise dessa reação é retardada se houver um resíduo ácido em qualquer um dos lados do sítio de clivagem e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxílico do sítio de clivagem. O pH ideal para atividade da tripsina é 7-9. A tripsina pode agir também para clivar ligações de ésteres e amidas em derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado às soluções de tripsina como agente quelante que neutraliza os íons de cálcio e magnésio que obstruem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.

Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.

Componentes

A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos, produzido pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação peptídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.

Atenção

As soluções em HCl 1 mM são estáveis por 1 ano em alíquotas e armazenadas a -20 °C. A presença de Ca²⁺ também diminui a autólise de tripsina e mantém sua estabilidade em solução. A tripsina também retém a maior parte de sua atividade em ureia 2,0 M, guanidina HCl 2,0 M ou SDS 0,1% (p/v).

Definição da unidade

Uma unidade de BAEE produz um ΔA₂₅₃ de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato. Uma unidade de BTEE = 320 unidades de ATEE. Volume de reação = 3,2 ml (caminho óptico de 1 cm).

Nota de preparo

Esse produto é um pó liofilizado solúvel em solução salina balanceada de Hank na concentração de 25 mg/ml.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves