C5894

Collagénase from Clostridium histolyticum

non-sterile; 0.2 μm filtered, Type IA-S, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Synonyme(s) : Clostridiopeptidase A
• CAS Number: 9001-12-1
• Numéro CE : 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-582-9
• Numéro MDL: MFCD00130830
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Niveau de qualité: 200
• Stérilité: non-sterile; 0.2 μm filtered
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• Poids mol.: 68-130 kDa
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

Collagenase has been used in the preparation of arterial tissue for the study of Advanced Glycosylation End Products (AGE). The enzyme has also been used along with other proteases for the disaggregation of human tumor, mouse kidney, human brain, lung epithelium and many other tissues. It is also used for liver and kidney perfusion studies, digestion of pancreas, and isolation of nonparenchymal hepatocytes. This enzyme is tested for the release of hepatocytes at approx.1 mg/mL conc. (in a total volume of 100 mL for each rat liver).

Actions biochimiques/physiologiques

La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.

Effective release of cells from tissue requires the action of collagenase enzymes and the neutral protease. Collagenase is activated by four gram atom calcium (Ca²⁺) per mole enzyme. The culture filtrate is thought to contain at least 7 different proteases ranging in molecular weight from 68-130 kDa. The pH optimum is 6.3-8.8. The enzyme is typically used to digest the connective components in tissue samples to liberate individual cells. Collagenase treatment can cause some cells to die. Typically, concentrations varying from 0.1 to 5 mg/mL are used for digestion. The duration of reaction varyies from 15 minutes to several hours and yields a satisfactory cell dissociation without causing too much cell death. Krebs Ringer buffer with calcium and BSA is preferred and Zn²⁺ is required for activity.

Attention

As supplied, this product is stable for one year at -20°C. There is no loss in FALGPA or protease activity in 30 days at 37°C, 50°C and -20°C. Solutions of crude collagenase are stable if frozen quickly in aliquots (at 10 mg/mL) and kept frozen at -20°C. Further freeze-thaw cycles will damage the solution. The product retains 100% activity over 7 hours when held on ice.

Définition de l'unité

Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.

Notes préparatoires

Solutions are typically prepared at 1-2 mg/mL in TESCA buffer (containing 50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4 at 37°C.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08,GHS07
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315,H319,H334,H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves