T1005

Trypsine from bovine pancreas

Type XI, lyophilized powder, ≥6,000 BAEE units/mg protein

• Synonyme(s) : Serine Protease 1
• CAS Number: 9002-07-7
• Numéro CE : 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-650-8
• Numéro MDL: MFCD00082094
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.78

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Niveau de qualité: 200
• Type: Type XI
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥6,000 BAEE units/mg protein
• Poids mol.: 23.8 kDa
• Composition: protein, 90-100%
• Impuretés: salt, essentially free
• Solubilité: hydrochloric acid: soluble 1 mM, clear
• Activité étrangère: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La trypsine de pancréas de bovin a été utilisée :

• dans un protocole de trypsination, pour éliminer l'alloantigène lié à la membrane
• pour l'incubation d'un composé liant l'amylase de 20 kD afin de déterminer sa nature chimique
• dans la préparation de produits de dégradation de la lactoferrine afin d'évaluer son action antiadipogénique

Pour la digestion de peptides par la trypsine, utiliser un rapport trypsine/peptide d′environ 1/100 à 1/20. Ce produit est généralement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l′ancienneté de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre en suspension des cellules lors d′une culture cellulaire, en recherche protéomique pour la digestion de protéines et dans diverses digestions en gel. Parmi ses autres applications, on peut citer l′évaluation de la cristallisation par des techniques à base de membrane et la détermination du fait que les vitesses et les rendements de repliement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.

Actions biochimiques/physiologiques

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. De l′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.

Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Composants

La trypsine comprend un polypeptide monocaténaire de 223 résidus d'acides aminés obtenu par clivage de l'hexapeptide N-terminal du trypsinogène au niveau de la liaison peptidique Lys-lle. Sa séquence d'acides aminés est stabilisée par 6 ponts disulfure. Il s'agit de la forme native de la trypsine : la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut subir une autolyse, par clivage au niveau des résidus Lys-Ser, produisant l'alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.

Attention

Les solutions préparées dans du chlorure d'hydrogène 1 mM sont stables pendant un an lorsqu'elles sont conservées en aliquotes à -20 °C. De plus, la présence de Ca²⁺ limite l'autolyse de la trypsine et assure sa stabilité en solution. On notera par ailleurs que la trypsine conserve l'essentiel de son activité dans l'urée 2,0 M, le chlorhydrate de guanidine 2,0 M ou le SDS à 0,1 % (p/v).

Définition de l'unité

Une unité de BAEE produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat.

Notes préparatoires

Ce produit est issu de pancréas provenant de Nouvelle-Zélande. Il est soluble dans le chlorure d'hydrogène 1 mM à 1 mg/ml.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08,GHS07
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315,H319,H334,H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves