T8658

Tripsina

Name: Tripsina
Brand: SIGMA

suitable for protein sequencing, lyophilized powder

Sinonimo/i:

Porcine Trypsin, Trypsin for Mass Spectropetry

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About This Item

CAS Number:

9002-07-7

Numero CE:

3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)

Numero CE:

232-650-8

Numero MDL:

MFCD00082094

Codice UNSPSC:

12352204

NACRES:

NA.56

Documenti fondamentali

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Grado

Proteomics Grade

Livello qualitativo

200

Stato

lyophilized powder

PM

23.8 kDa

Confezionamento

vial of 100 μg

Solubilità

hydrochloric acid: soluble 1 mM, clear

Compatibilità

suitable for protein sequencing

Temperatura di conservazione

−20°C

Applicazioni

Per la digestione di peptidi con la tripsina, utilizzare un rapporto compreso all′incirca tra 1:100 e 1:20 per tripsina:peptide. L′impiego tipico di questo prodotto consiste nella rimozione delle cellule aderenti da una superficie di coltura. La concentrazione di tripsina necessaria per staccare le cellule dal relativo substrato dipende principalmente dal tipo di cellule e dall′età della coltura. Le tripsine sono state adoperate anche per la ri-sospensione delle cellule durante la coltura cellulare, nella ricerca proteomica per la digestione delle proteine e in varie digestioni in gel. Ulteriori applicazioni comprendono la valutazione della cristallizzazione con tecniche basate su membrana e l′impiego in uno studio per stabilire se i tassi e la resa del folding proteico possono essere limitati dalla presenza di trappole cinetiche.

Trypsin from bovine pancreas has been used for in-gel digestion for MS (mass spectrometry) analysis.
It has been used for the digestion of albumin for size-exclusion chromatography.
It has been used for the digestion of HDL (high density lipoprotein) for LC-MS (liquid chromatography-mass spectrometry) analysis.
It has been used for limited proteolysis of IST1 (putative MAPK-activating protein PM28).

Azioni biochim/fisiol

La tripsina scinde i peptidi sul lato C-terminale dei residui di lisina e arginina. La velocità di idrolisi di questa reazione viene rallentata se su uno dei lati del sito di scissione è presente un residuo acido. L′idrolisi si arresta se sul lato carbossile del sito di scissione è presente un residuo di prolina. Il pH ottimale per l′attività della tripsina è 7-9. La tripsina può anche scindere i legami esterei e ammidici dei derivati sintetici degli amminoacidi. L′EDTA viene aggiunto alle soluzioni di tripsina come agente chelante che neutralizza gli ioni di calcio e magnesio che oscurano i legami peptidici su cui agisce la tripsina. La rimozione di questi ioni aumenta l′attività enzimatica.

Gli inibitori delle serin proteasi, tra cui ad esempio DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e aprotinina, inibiscono la tripsina.

Componenti

Trypsin consists of a single chain polypeptide of 223 amino acid residues, produced by the removal of the N-terminal hexapeptide from trypsinogen which is cleaved at the Lys - lle peptide bond. The sequence of amino acids is cross-linked by 6 disulfide bridges. This is the native form of trypsin, beta-trypsin. BETA-trypsin can be autolyzed, cleaving at the Lys - Ser residue, to produce alpha-trypsin. Trypsin is a member of the serine protease family.

Avvertenza

Solutions in 1 mM HCl are stable for 1 year in aliquots and stored at -20°C. The presence of Ca²⁺ will also diminish the self-autolysis of trypsin and maintain its stability in solution. Trypsin will also retain most of its activity in 2.0 M urea, 2.0 M guanidine HCl, or 0.1% (w/v) SDS.