T9935

トリプシン ウシ膵臓由来

essentially salt-free, lyophilized powder, ≥9,000 BAEE units/mg protein, BioReagent, suitable for cell culture

• 別名: Serine Protease 1
• CAS Number: 9002-07-7
• EC Number: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-650-8
• MDL番号: MFCD00082094
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 製品種目: BioReagent
• 品質水準: 200
• フォーム: essentially salt-free, lyophilized powder
• 比活性: ≥9,000 BAEE units/mg protein
• 分子量: 23.8 kDa
• 組成: protein, ≥80%
• テクニック: cell culture | mammalian: suitable
• 溶解性: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

ウシ膵臓由来のトリプシンは、ヒト髄核（NP）細胞分離においてNP細胞酵素的消化に使用されています。細胞精製用のイムノパニング試薬としても使用されています。

ペプチドのトリプシン消化には、トリプシン：ペプチドに対して約1：100から1：20の比率を使用します。この製品の一般的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。基質から細胞を取り除くのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞の種類と培養期間に依存します。トリプシンは、細胞培養中の細胞の再懸濁、タンパク質の消化のためのプロテオミクス研究、および様々なゲル内消化にも使用されています。その他の用途には、膜ベースの手法による結晶化の評価や、タンパク質フォールディング速度と収量が動的トラップの存在によって制限されうることを確認する研究が含まれます。

生物化学的／生理学的作用

トリプシンは、リジンおよびアルギニン残基のC末端側のペプチドを切断します。酸性残基が切断部位の両側にある場合、この反応の加水分解速度は遅くなり、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合、加水分解は停止します。トリプシン活性の至適pHは7～9です。また、トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステルおよびアミド結合を切断するよう作用します。EDTAは、トリプシンが作用するペプチド結合を不明瞭にするカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤としてトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると、酵素活性が増加します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

構成

トリプシンは、アミノ酸残基223個の単鎖ポリペプチドで構成され、Lys-lleペプチド結合で切断されるトリプシノーゲンからN末端ヘキサペプチドを除去することにより生成されます。アミノ酸配列は、6つのジスルフィド架橋によって架橋されています。これは天然型のトリプシン、ベータトリプシンです。ベータトリプシンは自己分解され、Lys-Ser残基が切断されて、アルファトリプシンが生成されます。トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーの1つです。

注意

1 mM HCl溶液はアリコートで-20℃で保存して1年間安定です。Ca2⁺が存在する場合もトリプシンの自己消化が減少し、その溶液中での安定性が維持されるものと予想されます。2.0 M尿素、2.0 MグアニジンHCl塩、または0.1％ (w/v) SDS中でもその活性の大半は維持されるものと予想されます。

単位の定義

基質として1単位のBAEEを使用したとき、pH 7.6、25°CにおけるA₂₅₃は0.001/分となります。

調製ノート

本製品はニュージーランドから供給された膵臓に由来します。1 mM HClに1 mg/mLで溶解します。
EDTAに関与する用途の場合、Ca²⁺とMg²⁺のいずれも含有しない緩衝塩溶液でトリプシンを可溶化してください。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08,GHS07
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H315,H319,H334,H335
• 注意書き: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• ターゲットの組織: Respiratory system
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves