Hodowla komórek ssaków

Hodowla komórek ssaków In Vitro

Wzrost komórek wymaga złożonej mieszanki składników odżywczych, w tym cukrów, aminokwasów, albuminy, witamin, minerałów i czynników wzrostu. Pożywki do hodowli komórkowych dostarczają tych niezbędnych składników odżywczych do hodowli komórek ssaków in vitro. Kultury komórek ssaków są hodowane w inkubatorach, które zapewniają sterylne środowisko do wzrostu w optymalnej temperaturze (37 °C) z 5% CO₂ w celu utrzymania poziomu pH podobnego do poziomu pH krwi ssaków.

Z wyjątkiem niektórych rodzajów komórek krwi, które mogą być hodowane w zawiesinie, większość komórek pochodzących z tkanek ssaków wymaga przylegania do powierzchni w celu prawidłowego podziału i wzrostu komórek. Powierzchnie do hodowli komórek są zapewniane przez poddane obróbce polistyrenowe lub szklane kolby, płytki i filtry przeznaczone do mocowania komórek. Przyleganie komórek może być ułatwione dzięki zastosowaniu syntetycznych polimerów, takich jak poli-D-lizyna (PDL) i białek macierzy pozakomórkowej, w tym kolagenu, które zapewniają ramę mocującą dla adhezji.

Techniki w hodowli komórek ssaków

Aseptyczne techniki są stosowane w celu zapobiegania zanieczyszczeniu komórek hodowanych in vitro. Hodowle komórek ssaków wymagają pasażowania lub subkulturowania - co obejmuje rozcieńczanie komórek, które osiągnęły konfluencję i zastępowanie zubożonego podłoża hodowlanego - dla zdrowia i rozmnażania komórek. W celu pasażowania przylegających kultur komórkowych, komórki muszą zostać oddzielone od powierzchni hodowli przy użyciu metod enzymatycznych, takich jak trypsynizacja lub metod mechanicznych, takich jak skrobanie, przed przeniesieniem do nowych kolb hodowlanych lub płytek w celu ponownego przyłączenia. Metody liczenia komórek przy użyciu hemacytometrów i automatycznych liczników komórek oceniają żywotność komórek i pomagają określić gęstość wysiewu do pasażowania i odpowiednią gęstość komórek dla dalszych procesów. Hodowane komórki mogą być kriokonserwowane poprzez przechowywanie w ciekłym azocie, z którego zapasy nasion mogą być rozmrażane, gdy zapasy robocze są ponownie potrzebne.