Techniki ściągania białek

Affinity GST Pull-Down Applications

S-transferaza glutationowa (GST) to 211-aminokwasowe białko występujące w większości organizmów. GST jest często integrowana z wektorami ekspresyjnymi w celu wytworzenia znacznika fuzyjnego w systemach ekspresji białek E. coli. Znacznik GST jest dużym znacznikiem białkowym, około 26 kDa, i może być wyrażany w komórkach bakterii, drożdży, ssaków i owadów. Znacznik GST jest korzystny, gdy wymagana jest ochrona rekombinowanego białka przed wewnątrzkomórkowym rozszczepieniem proteazy oraz gdy istnieje potrzeba zwiększenia rozpuszczalności znakowanego białka. Ponadto białko GST zapewnia znacznik o wysokim powinowactwie do łatwego oczyszczania i eksperymentów pull-down wykorzystujących niedrogie żywice powinowactwa, które są przeprowadzane w łagodnych warunkach elucji.

Co-immunoprecypitacja

Test pull-down jest idealny do weryfikacji wyników ko-immunoprecypitacji i jest doskonałą metodą identyfikacji nieznanych interakcji białko-białko wraz ze stanem aktywacji określonych białek. W przeciwieństwie do metod ściągania powinowactwa, IP wykorzystuje przeciwciała do wiązania i izolowania antygenów ze złożonych próbek biologicznych. 

Co-IP odnosi się do stosowania przeciwciała do wiązania antygenu w kompleksie wielobiałkowym. Kompleks jest następnie wychwytywany z dodatkiem białka A lub białka G. Wysokie powinowactwo białka A/G do regionu Fc przeciwciał poliklonalnych i monoklonalnych typu IgG sprawia, że są one krytycznym składnikiem w oczyszczaniu białka lub kompleksu białkowego będącego przedmiotem zainteresowania. Zastosowanie metod ściągania białek jest niezbędnym narzędziem do badania sieci interakcji białko-białko; jednak wybór konkretnej metody będzie zależał od konkretnych potrzeb naukowca.