05-1338

Przeciwciało przeciwko dimetylowi histonu H3 (Lys4), klon CMA303

clone CMA303, from mouse

• Synonim(y): H3K4me2, histon H3 (di metyl K4), rodzina histonów H3, członek T, histon 3, H3, klaster histonów 3, H3
• Kod UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: mouse
• Poziom jakości: 100
• forma przeciwciała: purified immunoglobulin
• rodzaj przeciwciała: primary antibodies
• klon: CMA303, monoclonal
• reaktywność gatunkowa: human, vertebrates
• metody: ChIP: suitable; ELISA: suitable; dot blot: suitable; immunocytochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; multiplexing: suitable; western blot: suitable
• izotyp: IgG1κ
• numer dostępu NCBI: NM_003493
• numer dostępu UniProt: Q16695
• Warunki transportu: wet ice
• docelowa modyfikacja potranslacyjna: dimethylation (Lys4)
• informacje o genach: human ... H3C1(8350)

Opis

Opis ogólny

Histony to wysoce konserwatywne białka, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Następnie 146 par zasad DNA owija się wokół oktameru, tworząc nukleosom. Histony są modyfikowane potranslacyjnie, a modyfikacje te regulują transkrypcję, naprawę, rekombinację i replikację DNA. Najczęściej badanymi modyfikacjami są acetylacja, fosforylacja, metylacja i ubikwitynacja. Modyfikacje występują głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Dimetylo-lizyna 4 histonu H3 (H3K4me2) jest znacznikiem chromatynowym aktywującym transkrypcję, a dimetyl histonu H3 Lys4 (H3K4me2) jest usuwany z regionów z metylacją DNA. Multipotencjalne komórki hematopoetyczne mają podzbiór genów, które są różnie metylowane (H3K4me2+/me3-). Geny te są transkrypcyjnie nieme i wysoce wzbogacone w geny hematopoetyczne specyficzne dla linii, co sugeruje rolę metylacji H3K4 w różnicowaniu.

Specyficzność

Na podstawie homologii sekwencji spodziewana jest szeroka reaktywność krzyżowa między gatunkami.

To przeciwciało specyficznie rozpoznaje histon H3 dimetylowany w Lys4. Specyficzność wiązania przeciwciała pozwala na fosforylację Thr3 i/lub modyfikacje Lys91.

Immunogen

Epitop: Dimetylowana Lys4

Syntetyczny peptyd odpowiadający aminokwasom 1-12 ludzkiego histonu H3, dimetylowany na Lys4, sprzężony z KLH.

Zastosowanie

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X 106 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µg normalnej mysiej IgG lub przeciwciała przeciw dimetylo-histonie H3 (Lys4) i zestawu Magna ChIP G (nr kat. 17-611). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z dimetylo-histonem H3 (Lys4) została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP kodujących GAPDH.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna G ChIP (nr kat. 17-409) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Dot Blot:
Absurance Histone H3 Antibody Specificity Array (nr kat. 16-667) i Absurance Histone H2A, H2B, H4 Antibody Specificity Array (nr kat. 16-665), które zawierają peptydy histonowe z różnymi modyfikacjami, były sondowane za pomocą Cat. 05-1338, Anti-dimethyl H3 (Lys4), klon CMA303 w stężeniu 2,0 µg/ml (rozcieńczenie 1:500). Białka wizualizowano przy użyciu IgG anty-mysiej osła sprzężonej z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.

Analiza ChIP-seq:
Immunoprecypitację chromatyny przeprowadzono przy użyciu zestawu Magna ChIP HiSens (nr kat. 17-10460), 2 µg przeciwciała anty-dimetylo-histonowego H3 (Lys4) (nr kat. 05-1338), 20 µL kulek Protein A/G i 1e6 usieciowanej chromatyny komórek HeLa, a następnie oczyszczono DNA za pomocą kulek magnetycznych. Biblioteki zostały przygotowane z próbek Input i ChIP DNA przy użyciu standardowych protokołów z adapterami Illumina z kodem kreskowym i analizowane na instrumencie Illumina HiSeq. Ponad szesnaście milionów odczytów z plików FastQ zmapowano za pomocą Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) po usunięciu tagów TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Piki zostały zidentyfikowane przy użyciu MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/), z pikami i odczytami wizualizowanymi jako niestandardowa ścieżka w UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu) z plików BigWig i BED. Najwyższe 25% pików zidentyfikowanych w zbiorach danych 04-790 i 05-1338 wykazało 92 i 90% pokrywania się z pikami zidentyfikowanymi w ścieżce ENCODE H3K4me2 BROAD Histone dla HeLa S3.

Immunocytochemia:
To przeciwciało zostało wykazane przez zewnętrzne laboratorium jako odpowiednie do immunocytochemii.

Immunoprecypitacja:
Zewnętrzne laboratorium wykazało, że to przeciwciało nadaje się do immunoprecypitacji.

ELISA:
Zewnętrzne laboratorium wykazało, że to przeciwciało nadaje się do testu ELISA

Multipleksowanie:
To przeciwciało specyficznie rozpoznaje histon H3 dimetylowany na Lys4 w teście Luminex.

Anti-Dimethyl Histone H3 (Lys4) Antibody, klon CMA303 to mysie przeciwciało monoklonalne do wykrywania dimetylowego histonu H3 (Lys4) znanego również jako H3K4me2, Histone H3 (di methyl K4). Zademonstrowana wydajność w ChIP, DB, ELISA, ICC, IP, WB, Mplex.

Kategoria badawcza
Epigenetyka i funkcje jądrowe

Podkategoria badawcza
Histony

Jakość

Routinely evaluated by Western Blot on HeLa acid extract.

Western Blot Analysis: 2 μg/mL (1:500) dilution of this antibody detected dimethyl Histone H3 (Lys4) on 10 μg of HeLa acid extract.

Opis wartości docelowych

ok. 17 kDa

Postać fizyczna

Format: Oczyszczony

Oczyszczona mysia monoklonalna IgG1κ w PBS z 0,05% azydkiem sodu.

Oczyszczone białko G

Przechowywanie i stabilność

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze 2-8°C od daty otrzymania. Aby uzyskać maksymalny odzysk produktu, należy odwirować fiolkę przed zdjęciem korka. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Komentarz do analizy

Kontrola
Lizat ekstraktu kwasu HeLa

Inne uwagi

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 2
• Temperatura zapłonu (°F): Not applicable
• Temperatura zapłonu (°C): Not applicable