T7E1001
Test wykrywania endonukleazy T7
Gene editing analysis kit with T7 endonuclease digestion and detection by SDS-PAGE
Synonim(y):
Test endonukleazy T7
Zaloguj sięWyświetlanie cen organizacyjnych i kontraktowych
About This Item
Kod UNSPSC:
12352200
NACRES:
NA.51
Pomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomócPomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomócopakowanie
kit of 6 vials (reagents for 25 Reactions)
Warunki transportu
dry ice
temp. przechowywania
−20°C
Opis ogólny
Test wykrywania endonukleazy T7 jest dobrze znaną metodą wykrywania zdarzeń edycji genomu za pomocą CRISPR, nukleazy cynkowo-palcowej i celowania genów TALEN. Pierwotnie zidentyfikowana z bakteriofaga Escherichia coli, endonukleaza T7 może rozszczepiać niedopasowane heterodupleksowe DNA, złącza Hollidaya, rozgałęzione DNA i krzyżowe DNA.
Po przeprowadzeniu eksperymentu edycji genów, genomowe DNA otaczające docelowy locus jest amplifikowane metodą PCR, a amplikony PCR są denaturowane i reanalizowane poprzez ogrzewanie i powolne chłodzenie. Jeśli wystąpiły zdarzenia NHEJ, to po ponownym wyżarzeniu możliwych jest kilka produktów. Homodupleksy mogą tworzyć się, gdy nić WT jest reanalizowana do nici WT lub nić niosąca indel jest reanalizowana do nici niosącej indel. Heterodupleksy tworzą się, gdy nić WT jest reanulowana do nici niosącej indel, powodując niedopasowanie. Produkty heterodupleksów z niedopasowaniami są rozszczepiane przez endonukleazę T7. Rozdzielenie produktów DNA po traktowaniu endonukleazą T7 za pomocą elektroforezy żelowej spowoduje powstanie wzoru pasmowego wskazującego na ilość heterodupleksów w próbce. Ilość rozszczepionych heterodupleksów jest bezpośrednio związana z ilością aktywności indel.
Po przeprowadzeniu eksperymentu edycji genów, genomowe DNA otaczające docelowy locus jest amplifikowane metodą PCR, a amplikony PCR są denaturowane i reanalizowane poprzez ogrzewanie i powolne chłodzenie. Jeśli wystąpiły zdarzenia NHEJ, to po ponownym wyżarzeniu możliwych jest kilka produktów. Homodupleksy mogą tworzyć się, gdy nić WT jest reanalizowana do nici WT lub nić niosąca indel jest reanalizowana do nici niosącej indel. Heterodupleksy tworzą się, gdy nić WT jest reanulowana do nici niosącej indel, powodując niedopasowanie. Produkty heterodupleksów z niedopasowaniami są rozszczepiane przez endonukleazę T7. Rozdzielenie produktów DNA po traktowaniu endonukleazą T7 za pomocą elektroforezy żelowej spowoduje powstanie wzoru pasmowego wskazującego na ilość heterodupleksów w próbce. Ilość rozszczepionych heterodupleksów jest bezpośrednio związana z ilością aktywności indel.
Zastosowanie
Genomika funkcjonalna; Walidacja celu; Edycja genomu
Cechy i korzyści
- Technicznie prosta metoda oparta na dobrze znanych technikach
- Łatwe do interpretacji wyniki
- Szybka realizacja analizy
- Opłacalność
Komponenty
Each kit consists of:
- one vial of T7 Endonuclease I
- one vial of Control Template and Primer Mix
- one vial of Buffer solution
- one vial of DNA Ladder - 1KB
- one vial of Gel Loading Dye (6X)
- one vial of Proteinase K
Zasada
Systemy CRISPR/Cas są wykorzystywane przez bakterie i archeony do obrony przed inwazją wirusów i plazmidów. Niedawno system CRISPR/Cas typu II z bakterii Streptococcus pyogenes został zaprojektowany do funkcjonowania w systemach eukariotycznych przy użyciu dwóch składników molekularnych: pojedynczego białka Cas9 i niekodującego RNA (gRNA). Endonukleazę Cas9 można zaprogramować za pomocą gRNA, kierując dwuniciowe pęknięcie DNA (DSB) w pożądane miejsce genomu. Podobne do DSB są również indukowane przez nukleazy cynkowo-palcowe (ZFN) i TALEN. Następnie komórka aktywuje endogenne procesy naprawy DNA, albo niehomologiczne łączenie końców (NHEJ), albo naprawę ukierunkowaną homologicznie (HDR), aby wyleczyć docelowe DSB.
Skuteczność edycji genów może się różnić w dużej mierze ze względu na sekwencje docelowe. Struktura chromatyny i niektóre elementy sekwencji, na przykład wysoka zawartość GC, mogą hamować edycję w niektórych sekwencjach genomowych, wpływając na aktywność sgRNA. Dodatkowo, korzystne zasady w sekwencji sgRNA, takie jak guanina proksymalnie do PAM, mogą promować aktywność sgRNA, ale te preferowane zasady mogą nie być dostępne w miejscu docelowym. Ważne jest, aby ocenić zdolność edycji genów kilku sgRNA poprzez ilościowe określenie częstotliwości modyfikacji przy użyciu metody takiej jak wykrywanie niedopasowania endonukleazy T7.
Skuteczność edycji genów może się różnić w dużej mierze ze względu na sekwencje docelowe. Struktura chromatyny i niektóre elementy sekwencji, na przykład wysoka zawartość GC, mogą hamować edycję w niektórych sekwencjach genomowych, wpływając na aktywność sgRNA. Dodatkowo, korzystne zasady w sekwencji sgRNA, takie jak guanina proksymalnie do PAM, mogą promować aktywność sgRNA, ale te preferowane zasady mogą nie być dostępne w miejscu docelowym. Ważne jest, aby ocenić zdolność edycji genów kilku sgRNA poprzez ilościowe określenie częstotliwości modyfikacji przy użyciu metody takiej jak wykrywanie niedopasowania endonukleazy T7.
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Hasło ostrzegawcze
Danger
Zwroty wskazujące rodzaj zagrożenia
Zwroty wskazujące środki ostrożności
Klasyfikacja zagrożeń
Resp. Sens. 1
Kod klasy składowania
12 - Non Combustible Liquids
Wybierz jedną z najnowszych wersji:
Certyfikaty analizy (CoA)
Lot/Batch Number
It looks like we've run into a problem, but you can still download Certificates of Analysis from our Dokumenty section.
Proszę o kontakt, jeśli potrzebna jest pomoc Obsługa Klienta
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej