Procedury opadowe

Wytrącanie białek jest opcjonalnym etapem przygotowania próbki do elektroforezy 2-D. Wytrącanie, po którym następuje ponowne zawieszenie w roztworze próbki, jest zwykle stosowane w celu selektywnego oddzielenia białek w próbce od gatunków zanieczyszczających, takich jak sole, detergenty, kwasy nukleinowe, lipidy itp. Wytrącanie, po którym następuje ponowne zawieszenie, może być również stosowane do przygotowania stężonej próbki białka z rozcieńczonego źródła (np. tkanek roślinnych, moczu). Należy jednak pamiętać, że żadna technika wytrącania nie jest całkowicie skuteczna, a niektóre białka mogą nie łatwo ulec ponownemu zawieszeniu po wytrąceniu. W związku z tym zastosowanie etapu wytrącania podczas przygotowywania próbki może zmienić profil białkowy próbki. Gdy kompletna i dokładna reprezentacja wszystkich białek w próbce ma ogromne znaczenie, należy unikać wytrącania i ponownego zawieszania.

2-D Clean-Up Kit firmy Cytiva może być stosowany do usuwania substancji zanieczyszczających i poprawy wzoru elektroforezy 2-D. Białka są wytrącane za pomocą kombinacji odczynników strącających, podczas gdy substancje zakłócające, takie jak kwasy nukleinowe, sole, lipidy lub detergenty, pozostają w roztworze. Próbki można ponownie zawiesić w pożądanym roztworze denaturującym do IEF. Każdy zestaw może przetworzyć 50 próbek o objętości do 100 µL każda. Sekcja 1.4.1 (Oczyszczanie próbek przy użyciu zestawu 2-D Clean-Up Kit) opisuje zestaw i zawiera protokół użytkowania.

Tabela 8 zawiera listę niektórych technik wytrącania, które mogą być stosowane. Jeśli przygotowanie próbki wymaga wytrącania, zazwyczaj stosuje się tylko jedną technikę wytrącania.