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Mélange de marquage d′ARN à la DIG

sufficient for 20 reactions, solution

• Synonyme(s) : marquage d’acide nucléique
• Code UNSPSC : 41105500

Propriétés

• Forme: solution
• Niveau de qualité: 100
• Utilisation: sufficient for 20 reactions
• Conditionnement: pkg of 40 μL
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Impuretés: Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
• Couleur: colorless
• Solubilité: water: miscible
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

Efficacité du marquage : Environ 10 μg d′ARN de taille complète attendue marqué à la digoxigénine est transcrit à partir de 1 μg d′ADN de matrice linéaire.
Durée de l′essai : 135 minute
Échantillons
ADN de plasmide linéarisé
L′ADN à transcrire est cloné dans le site de clonage multiple d′un vecteur de transcription adapté, qui contient un promoteur de l′ARN polymérase SP6, T7 ou T3 en position adjacente. Pour la transcription des transcrits « run off », le plasmide est linéarisé par une enzyme de restriction. Des enzymes de restriction qui créent des extrémités 5′ sortantes doivent être utilisées ; ne pas utiliser d′extrémités 3′ sortantes. L′ADN de matrice linéarisé doit être purifié par extraction au phénol/chloroforme et précipitation à l′éthanol pour éviter la contamination par une RNase. Pour la transcription « run around », un plasmide circulaire est utilisé comme matrice.
Produit de la PCR :
Les fragments de PCR contenant des séquences de promoteur de l′ARN polymérase peuvent également être utilisés comme matrices pour la transcription. Il est recommandé de purifier les fragments de PCR à l′aide de colonnes HighPure.

Des sondes d′ARN simple brin de taille définie et marquées à la DIG sont générées par transcription in vitro. Le DIG-11-UTP est incorporé par les ARN polymérases SP6, T7 et T3 à un taux d′environ 1 par 20 à 25 nucléotides de transcrit dans les conditions standard. Le mélange de marquage d′ARN à la DIG est spécifiquement conçu pour être utilisé avec les ARN polymérases SP6, T7 et T3, qui sont fournies avec un tampon de transcription optimisé.
Mélange pratique pour marquer l′ARN avec digoxigénine-11-UTP.

Contenu
Solution 10x avec : 10 mM ATP, CTP, GTP (chaque), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.

Spécificité

Inactivation à la chaleur : Arrêter la réaction en ajoutant 2 μl d′EDTA 0,2 M (pH 8,0).

Application

Marquage de l′ARN avec digoxigénine-11-UTP par transcription in vitro à l′aide des ARN polymérases SP6, T7 et T3. L′ARN marqué à la DIG est employé dans diverses techniques d′hybridation :

• Northern blots
• Southern blots
• Dot blots
• Transfert de plages de lyse ou de colonies
• Essais de protection à la RNase
• Chromosomes, cellules et coupes de tissus in situ

Caractéristiques et avantages

Le mélange de marquage d′ARN à la DIG est spécifiquement conçu pour être utilisé avec les ARN polymérases SP6, T7 et T3 de Roche, qui sont fournies avec un tampon de transcription optimisé.

Qualité

Contrôle fonctionnel réalisé avec le kit de marquage d′ARN à la DIG et le kit de détection des acides nucléiques marqués à la DIG.

Autres remarques

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07
• Mention d'avertissement: Warning
• Mentions de danger: H302
• Conseils de prudence: P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P501
• Classification des risques: Acute Tox. 4 Oral
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash